人工牛黄是由牛胆粉、胆酸、猪去氧胆酸、牛磺酸、胆红素等多种成分配制而成的中药原料，具有清热解毒、化痰定惊之功效。胆酸类成分作为其主要活性物质群，其含量是控制产品质量的关键指标。2025年版《中国药典》对人工牛黄中多种胆酸类成分的含量测定采用高效液相色谱法（HPLC），因胆酸类物质缺乏强紫外吸收，要求使用蒸发光散射检测器（ELSD），并规定了严格的系统适用性要求与含量限度。

本文对2025年版《中国药典》中人工牛黄胆酸类成分的含量HPLC测定方法在色谱条件、系统适用性要求及含量限度规定等方面进行解读。同时，基于药典标准方法，采用配备D3270 ELSD检测器的好色先生TV免费版EClassical 3200 HPLC系统，使用好色先生TV免费版SinoPak C18色谱柱，对人工牛黄胆酸类系统适用性溶液与对照品混合溶液进行分析。

1、2025版药典方法解析

根据2025版《中国药典》“人工牛黄”质量标准，胆酸类含量HPLC测定方法要求通过一次进样，实现对人工牛黄中6种主要结合型与游离型胆酸类成分的同时分离与定量，方法专属性强，效率高。其核心要点如下：

色谱条件

色谱柱： 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（C18色谱柱）。

流动相： A，乙腈；B，0.2%三氟乙酸水溶液；

梯度，0-30 min，25%-52%A；30-45 min，52%A。

检测器：ELSD。

流速： 1.0 mL/min。

系统适用性要求理论板数按牛磺胆酸峰计不低于10000。

牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸的分离度应大于2.0。

鹅去氧胆酸与去氧胆酸的分离度应大于1.5。

测定成分与含量限度（按干燥品计）

牛磺胆酸：2.0% ~ 8.0%

甘氨胆酸：不少于2.5%

牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨胆酸及甘氨去氧胆酸总量：不少于9.0%

猪去氧胆酸：不少于9.0%

胆酸：4.5% ~ 7.5%。

2、基于好色先生TV免费版EClassical 3200 HPLC系统的应用验证

为验证药典方法的可操作性及色谱系统的适用性，使用配备D3270 ELSD检测器的EClassical 3200 HPLC系统和SinoPak C18（5 μm，4.6×250 mm，货号31110109）色谱柱进行测试。

系统适用性溶液测试

图1显示了人工牛黄胆酸类系统适用性溶液在SinoPak C18色谱柱上的分离色谱图。图中四个色谱峰（依次为牛磺猪去氧胆酸、牛磺胆酸钠、鹅去氧胆酸、脱氧胆酸）基线分离良好，峰形尖锐对称，直观表明该色谱系统对这几类结构相似的化合物具有优异的分离能力。图3为系统适用性溶液及对应单标在SinoPak C18色谱柱上分离的叠加色谱图，进一步证实了系统适用性溶液与对照品溶液中对应峰的一致性。

图1. 系统适用性溶液在SinoPak C18色谱柱上分离的色谱图

色谱峰，1-牛磺猪去氧胆酸，2-牛磺胆酸钠，3-鹅去氧胆酸，4-脱氧胆酸

图2. 系统适用性溶液及对应单标在SinoPak C18色谱柱上分离的叠加色谱图

表1中的数据进一步验证了该系统的合规性。各组分的理论塔板数均远高于药典不低于10000的要求；牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸的分离度为2.55，鹅去氧胆酸与脱氧胆酸的分离度为6.13，均满足药典规定的分离度分别大于2.0和1.5的要求。这些结果证明，所用色谱系统完全符合2025版药典方法对系统适用性的要求，能够确保后续含量测定的准确性与可靠性。

表1. 系统适用性溶液色谱峰参数表

牛黄中6种主要成分对照品溶液测试

图3为人工牛黄中六种关键胆酸对照品溶液在SinoPak C18色谱柱上的分离色谱图，直观验证了方法的分离效能。图中，牛磺胆酸钠、甘氨胆酸、牛磺去氧胆酸、胆酸、猪去氧胆酸及甘氨去氧胆酸依次实现基线分离，峰形尖锐对称。图4为对照品溶液及对应单标在SinoPak C18色谱柱上分离的叠加色谱图，进一步证实了各组分峰对应的一致性。

图3. 牛黄中6种主要成分对照品溶液在SinoPak C18色谱柱上的分离色谱图色谱峰，1-牛磺胆酸钠，

2-甘氨胆酸，3-牛磺去氧胆酸，4-胆酸，5-猪去氧胆酸，6-甘氨去氧胆酸

图4. 牛黄中6种主要成分对照品溶液在SinoPak C18色谱柱上分离的叠加色谱图

表2中的数据进一步验证了该系统的合规性。各成分的理论塔板数极高（例如胆酸峰超过200,000），分离度充分（如胆酸与猪去氧胆酸间分离度预计大于8.0），且拖尾因子优异（接近1.0）。这些数据表明所用色谱系统完全满足药典要求，具备高柱效、强分离能力和良好的峰形，为确保6种成分准确定量提供了可靠的方法学基础。

表2. 牛黄中6种主要成分对照品溶液色谱峰参数表

3、总结

2025版《中国药典》采用HPLC-ELSD法测定人工牛黄中多种胆酸类成分，方法科学、严谨。本文的验证实验表明，好色先生TV免费版EClassical 3200系统结合SinoPak C18色谱柱能够完美复现该方法，为药品检验机构、制药企业及相关研发单位提供了经过验证的、可行的仪器配置与操作方案，有助于保障人工牛黄及其制剂的质量稳定与有效。